——湖北安逸生物科技有限公司 · 靶向质谱检测平台
编者按：本文基于湖北安逸生物科技有限公司一例真实检测报告（2026-09-25），分享我们采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）定量血清与组织中腺苷蛋氨酸（SAM）与 S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）的方法学方案、验证性能与实际应用结果，并对现行标准/文献方法进行梳理与精度对比。
一、为什么要测 SAM 与 SAH？
● SAM（S-腺苷蛋氨酸，又称腺苷蛋氨酸）是体内最重要的“甲基供体”，参与 DNA、蛋白质、磷脂、神经递质等数以百计的甲基化反应；
● SAH（S-腺苷同型半胱氨酸）是 SAM 去甲基化后的产物，是甲基转移酶（MTase）的强抑制剂；
● 二者比值 SAM/SAH 被公认为细胞“甲基化潜能”的核心指标，与 DNA/蛋白甲基化、同型半胱氨酸代谢、叶酸/B12 营养状态及遗传性甲基化障碍代谢病密切相关。
检测难点：① SAM 在中性/碱性条件下不稳定、易降解；② 内源浓度低（健康人血浆多在 nmol/L 级）；③ SAM 与 SAH 结构相近，对色谱分离与质谱专属性要求高。
二、标准与文献方法现状
截至目前，国内外尚无专门针对“血清/组织中腺苷蛋氨酸（SAM）与 S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）”的强制性国家标准（GB）、行业标准、地方标准（DB）或团体标准（T/）。该类指标属于临床/科研“实验室自建方法（LDT）”，通常由检测机构依据 FDA/EMA/ICH M10《生物分析方法验证》或临床检验相关指南完成方法学验证后开展。
可作为方法学参照的相邻标准（同型半胱氨酸/氨基酸 LC-MS/MS 检测）包括：
● WS/T 635—2023《血清同型半胱氨酸临床检测指南》
● GB/T 34137—2017《临床检验中氨基酸检测方法》（含同型半胱氨酸，要求 LC-MS/MS 法检出限 ≤ 0.5 μmol/L、定量限 ≤ 1.0 μmol/L，批内 CV ≤ 8%、批间 CV ≤ 12%）
● GB/T 37864—2019（酶循环法）、GB/T 39506—2020（荧光偏振免疫法）、ISO 15193:2022 等。
文献中成熟方法（代表性）：
● Arning & Bottiglieri（Springer 方法学, 2016）：稳定同位素稀释 HPLC-ESI-MS/MS，离子对 399→250（SAM）、385→136（SAH），线性 12.5–5000 nmol/L；
● Ntasi 等（Metabolites, 2021）：HILIC-LC-MRM，按 FDA/EMA/ICH 验证，同步测定 9 种甲基化代谢物（含 SAM/SAH）；
● Rotman Primec 等：LC-MS/MS 同步定量叶酸-甲硫氨酸循环 5 种代谢物，M10 验证；SAM 线性 50–10000 μg/L（≈50–1000 ng/mL）、SAH 2.5–50 μg/L；
● Corrillero Bravo 等（Metabolites, 2022）：健康人血浆参考区间 SAM 120±36 nM、SAH 21.5±6.5 nM；
● 新加坡华人队列研究：批间 CV 6.2–9.2%（SAM）、5.9–10.4%（SAH），LOQ 5 nmol/L，曲线 25–400 nmol/L。
三、安逸生物的方法学方案
1. 样品前处理（针对不稳定性的专门设计）
取血清 50 μL 或组织 30 mg，以甲醇-乙腈（1:1）提取，超声辅助提取，高速离心取上清，冷冻干燥后加 200 μL 提取液复溶、过滤进样。针对 SAM 易降解的特性，全程低温、快速处理并尽快上机，最大限度保证回收率与稳定性——这正是自建方法中需要“摸出来”的关键经验。
2. 色谱条件（HILIC-Amide 解决强极性保留）
● 系统：Shimadzu LC30 超高效液相
● 色谱柱：Waters ACQUITY UPLC Amide（100 × 2.1 mm, 1.7 μm，HILIC 模式）——对强极性核苷类代谢物具有良好保留与峰形
● 流动相：A = 0.1% 甲酸水溶液；B = 乙腈；柱温 35 ℃；流速 0.3 mL/min；进样体积 1 μL
3. 质谱条件（与主流方法一致的“质谱指纹”）
● 仪器：Shimadzu LCMS-8050 三重四极杆；ESI 正离子模式；MRM
● SAM：母离子 399.1 → 250.1（定量离子对，CE −16）/ 399.1 → 136.05（定性离子对，CE −30）
● SAH：母离子 385.1 → 136.05（定量离子对，CE −23）/ 385.1 → 134.0（定性离子对，CE −21）
4. 标准曲线：配制 7 点标准曲线（10、20、50、100、200、500、1000 ng/mL），外标法定量，覆盖宽动态范围，可向下/向上扩展。
四、方法验证性能与精度对比
● 色谱分离（专属性优势）：SAH 与 SAM 实现基线分离，保留时间分别约 4.65 min 与 5.43 min；对比部分文献（HPLC 不能完全分离、仅靠质谱区分），本方法在色谱维度即完成拆分，抗干扰更强。
● 校准准确度（仪器级证据）：以最高校准点 STD-1000（标示 1000 ng/mL）为例，SAH 回算 1003.8 ng/mL（100.4%）、SAM 回算 999.3 ng/mL（99.9%）——接近理论浓度的 100%。
● 线性：校准曲线相关系数 R² ≥ 0.9999（以 SAH 段为例 R² = 0.9999447）。
● 定性专属性：每个化合物设“定量+定性”双离子对，并设定性离子相对丰度允许偏差窗口（0–30%），有效排除基质共流出假阳性。
方法对比表（本方法 vs 代表性文献/临床方法）
维度 | 安逸生物（本方法） | 文献代表方法 | 商业化第三方 |
仪器 | Shimadzu LCMS-8050（三重四极杆） | AB Sciex QTRAP 5500/4000 等 | 多平台（Sciex/Thermo/Waters） |
色谱 | HILIC-Amide（基线分离 SAM/SAH） | 反相/EZ:faast（部分仅靠 MS 区分）或 HILIC | 依项目而定 |
定量离子对 | 399→250（SAM）/ 385→136（SAH），设双离子对 | 同（399→250 / 385→136） | 同 |
定量范围 | 10–1000 ng/mL（可扩展） | SAM 50–1000 ng/mL；12.5–5000 nmol/L | 依套餐 |
精密度/准确度 | 校准回算 99.9–100.4%；R²≥0.9999 | 批间 CV 5.9–10.4%（文献） | 平台级验证（CV≤15%） |
基质覆盖 | 血清 + 组织（双基质） | 多为血浆/尿液/细胞 | 多为血清/血浆 |
内标策略 | 外标法 + 双离子对保证专属性 | 多采用稳定同位素内标稀释法 | 视方法 |
说明：文献方法公开发表了完整精密度（CV）数据，本检测报告重点展示了校准准确度（回算 99.9–100.4%）与线性（R²≥0.9999）等仪器级验证证据；按 ICH M10 的完整方法验证包（精密度、准确度、回收率、基质效应、稳定性等）可应需提供。两者技术路线一致、参数可比，本方法在“双基质覆盖 + 色谱基线分离 + 宽动态”方面具有差异化优势。
五、实际样品检测结果
血清样品（24 例，ng/mL）：SAM 含量范围 957.08–4959.05（均值 1996.13、中位 1724.38）；SAH 范围 8.57–115.91（均值 43.14、中位 36.29）。
组织样品（20 例，ng/g）：SAM 含量范围 493.01–23922.51（均值 3780.53、中位 1391.04）；SAH 范围 824.23–4469.40（均值 2771.68、中位 2795.14）。
注：以上为“不同处理”实验样本，浓度跨度高，方法在宽动态范围内稳定定量，血清与组织两类基质均适用。
表 1 血清样品 SAM / SAH 实测含量（ng/mL）
编号 | SAM | SAH | 编号 | SAM | SAH |
1 | 1030.25 | 8.57 | 2 | 1473.60 | 39.94 |
3 | 2474.73 | 115.91 | 4 | 957.08 | 32.81 |
5 | 2064.49 | 9.73 | 6 | 2013.70 | 56.25 |
7 | 1433.76 | 38.21 | 8 | 1615.35 | 35.77 |
9 | 2356.43 | 70.69 | 10 | 1143.32 | 11.32 |
11 | 3889.48 | 18.16 | 12 | 4429.90 | 60.63 |
13 | 4959.05 | 50.49 | 14 | 2207.37 | 114.73 |
15 | 1037.88 | 30.83 | 16 | 2706.56 | 23.95 |
17 | 1833.41 | 46.02 | 18 | 1875.62 | 36.81 |
19 | 2409.27 | 68.12 | 20 | 1305.38 | 30.98 |
21 | 1063.31 | 19.61 | 22 | 1159.19 | 35.24 |
23 | 1241.93 | 27.59 | 24 | 1226.08 | 52.96 |
表 2 组织样品 SAM / SAH 实测含量（ng/g）
编号 | SAM | SAH | 编号 | SAM | SAH |
25-26-1 | 4356.30 | 3542.01 | 25-26-2 | 4331.64 | 3610.74 |
26-01-1 | 20635.99 | 4165.94 | 26-01-2 | 23922.51 | 4469.40 |
26-35-1 | 1456.10 | 3364.19 | 26-35-2 | 1509.21 | 3266.53 |
CO-25-17-1 | 493.01 | 824.23 | CO-25-17-2 | 538.75 | 859.02 |
LC-7-26-21-1 | 1625.56 | 2344.42 | LC-7-26-21-2 | 1423.72 | 1855.86 |
LG-25-22-1 | 3494.70 | 2788.71 | LG-25-22-2 | 3658.43 | 2994.07 |
LG-25-27-1 | 1255.32 | 2290.45 | LG-25-27-2 | 1358.36 | 2801.57 |
LG-26-18-1 | 1286.14 | 2825.14 | LG-26-18-2 | 1307.06 | 2783.84 |
LG-26-20-1 | 542.78 | 2720.30 | LG-26-20-2 | 630.53 | 2931.88 |
LG-26-31-1 | 940.64 | 2564.78 | LG-26-31-2 | 843.91 | 2430.49 |
六、与第三方检测机构 / 科研单位的对比定位
● 商业化第三方：具备 CMA/CNAS/CAP 资质与规模化临床质谱平台，通常以“氨基酸/代谢组/营养素”套餐形式覆盖甲基化相关代谢物，SAM/SAH 多作为套餐子项；优势在合规资质与高通量，个性化“血清+组织双基质、可定制前处理”的专项定量未必是默认项目。
● 科研机构：多用于血浆/尿液 nM 级参考区间与机制研究（即上文文献），偏科研场景，一般不对外部承接方法开发与批量样本双基质定量。
● 安逸生物定位：依托岛津 LCMS-8050 + HILIC-Amide 平台，提供“方法开发 → 验证 → 样本检测 → 原始图谱可追溯”的一体化靶向代谢服务；双基质覆盖、宽动态、专属性强、可按课题定制前处理，特别适合药代/药效、营养干预、动物模型与机制研究中 SAM/SAH 的精准定量需求。
七、结语
从样品前处理对 SAM 不稳定性的专门应对，到 HILIC-Amide 对强极性化合物的基线分离，再到 399→250 / 385→136 与主流方法完全一致的定量离子对——本案例体现了湖北安逸生物在靶向代谢物 LC-MS/MS 方法开发与验证上的专业能力。在“无现成国标/行标，但有成熟文献方法”的现实下，我们以双基质覆盖、宽动态范围、色谱级专属性与仪器级准确度（回算 99.9–100.4%、R²≥0.9999），为科研与药企客户提供可信赖的 SAM/SAH 精准定量服务。
欢迎就方法开发、样本检测与定制化靶向代谢组需求与我们联系。